Menyediakan slaid tisu haiwan adalah teknik asas dalam penyelidikan biologi, pendidikan, dan diagnostik perubatan. Sebagai pembekal khususSlaid mikroskop biologidanSlaid mikroskop yang disediakan, Saya faham pentingnya slaid berkualiti tinggi untuk pemerhatian dan analisis yang tepat. Dalam blog ini, saya akan membimbing anda melalui langkah - dengan proses langkah menyediakan slaid tisu haiwan.
Langkah 1: Koleksi Contoh
Langkah pertama dalam menyediakan slaid tisu haiwan adalah untuk mengumpul sampel tisu yang sesuai. Pilihan tisu bergantung kepada tujuan penyelidikan atau diagnostik. Sebagai contoh, jika anda mengkaji struktur hati, anda perlu mendapatkan sampel tisu hati. Apabila mengumpul sampel, adalah penting untuk mengikuti garis panduan etika dan undang -undang. Di dalam makmal atau suasana perubatan, sampel sering diperoleh dari haiwan yang telah dikorbankan secara manusia atau semasa prosedur pembedahan.
Gunakan instrumen tajam dan bersih, seperti pisau bedah atau gunting, untuk mendapatkan sekeping kecil tisu. Saiz sampel tisu harus sesuai untuk langkah -langkah pemprosesan berikutnya. Umumnya, sampel yang tebal beberapa milimeter dan beberapa milimeter persegi di kawasan adalah mencukupi. Letakkan tisu yang dikumpulkan dengan serta -merta ke dalam penyelesaian fixative untuk mencegah autolisis (pencernaan diri) dan penangguhan.
Langkah 2: Penetapan
Penetapan adalah langkah kritikal yang mengekalkan struktur tisu. Fixatives berfungsi dengan silang - menghubungkan protein dan makromolekul lain dalam tisu, mencegah kemerosotan mereka. Salah satu fixatives yang paling biasa digunakan ialah formaldehid, biasanya dalam bentuk penyelesaian formalin buffered neutral 10%.
Tenggelamkan sampel tisu dalam fixative untuk tempoh yang sesuai. Masa penetapan bergantung pada saiz dan jenis tisu. Sampel tisu yang lebih kecil mungkin hanya memerlukan beberapa jam penetapan, manakala tisu yang lebih besar atau lebih padat mungkin memerlukan penetapan semalaman atau lebih lama lagi. Semasa penetapan, pastikan tisu sepenuhnya tenggelam dalam fiksatif, dan bekas itu dimeteraikan dengan ketat untuk mengelakkan penyejatan.
Langkah 3: Dehidrasi
Selepas penetapan, tisu mengandungi sejumlah besar air. Air tidak serasi dengan media penyembuhan yang digunakan dalam langkah seterusnya, jadi tisu perlu dehidrasi. Dehidrasi dicapai secara beransur -ansur menggantikan air dalam tisu dengan pelarut organik, biasanya etanol.
Mulakan dengan memindahkan tisu tetap ke satu siri penyelesaian etanol dengan peningkatan kepekatan. Sebagai contoh, anda boleh menggunakan siri 30%, 50%, 70%, 90%, dan 100%penyelesaian etanol. Setiap langkah harus bertahan untuk masa yang mencukupi untuk membolehkan etanol menembusi tisu dan menggantikan air. Tempoh setiap langkah bergantung kepada saiz dan jenis tisu, tetapi secara amnya, ia boleh berkisar antara 30 minit hingga beberapa jam untuk setiap kepekatan.
Langkah 4: membersihkan
Pembersihan adalah proses menghapuskan agen dehidrasi (etanol) dari tisu dan menggantikannya dengan ejen penjelasan yang boleh didapati dengan medium embedding. Xylene adalah ejen penjelasan yang biasa digunakan.
Pindahkan tisu dehidrasi ke xilena. Tisu akan menjadi telus apabila xilena menembusi dan menggantikan etanol. Waktu penjelasan boleh berubah dari 30 minit hingga beberapa jam, bergantung kepada saiz tisu dan ketumpatan. Adalah penting untuk diperhatikan bahawa xylene adalah toksik, jadi semua operasi yang melibatkan xylene harus dijalankan dalam hud asap yang berventilasi.
Langkah 5: Embedding
Embedding adalah proses mengelilingi tisu dengan medium pepejal yang memberikan sokongan untuk seksyen. Lilin parafin adalah medium embedding yang paling biasa digunakan.
Letakkan tisu yang dibersihkan ke dalam lilin parafin cair. Tisu harus berorientasikan dengan betul dalam acuan untuk memastikan satah seksyen yang dikehendaki dapat dicapai. Benarkan lilin parafin untuk menguatkan pada suhu bilik atau di dalam peti sejuk. Sebaik sahaja blok parafin adalah pepejal, ia boleh dipangkas kepada saiz yang sesuai untuk seksyen.
Langkah 6: Seksyen
Seksyen adalah proses memotong tisu tertanam ke dalam kepingan nipis. Microtome digunakan untuk tujuan ini. Tetapkan mikrotom ke ketebalan seksyen yang dikehendaki, yang biasanya antara 4 dan 10 mikrometer untuk kebanyakan sampel tisu haiwan.
Berhati -hati memotong blok parafin ke bahagian menggunakan microtome. Bahagian -bahagian ini akan terapung pada mandi air pada suhu sedikit di bawah titik lebur lilin parafin. Ini membantu meratakan bahagian -bahagian dan mengeluarkan sebarang kedutan.
Langkah 7: Pemasangan
Selepas seksyen, bahagian parafin perlu dipasang pada slaid mikroskop. Gunakan slaid kaca bersih dan ambil bahagian dari mandi air menggunakan slaid. Benarkan air untuk menguap, dan kemudian letakkan slaid pada hotplate hangat untuk membantu bahagian mematuhi slaid.
Langkah 8: Deparaffinization dan Rehydration
Sebelum pewarnaan, parafin perlu dikeluarkan dari bahagian -bahagian, dan tisu perlu dihidrat semula. Letakkan slaid yang dipasang di xilena untuk mengeluarkan parafin. Kemudian, pindahkan slaid melalui satu siri penurunan kepekatan etanol (100%, 90%, 70%, 50%, dan 30%) untuk memulihkan tisu.
Langkah 9: Pewarnaan
Pewarnaan adalah proses menambahkan warna ke bahagian tisu untuk meningkatkan keterlihatan komponen selular dan tisu yang berlainan. Hematoxylin dan eosin (H & E) pewarnaan adalah kaedah pewarnaan yang paling biasa digunakan dalam kajian histologi.
Hematoxylin mengotorkan nukleus biru - ungu, manakala eosin mengotorkan sitoplasma dan matriks ekstraselular merah jambu. Pertama, noda bahagian yang direhabilitasi dengan hematoxylin selama beberapa minit. Kemudian, bilas slaid dengan air dan membezakan noda hematoxylin menggunakan larutan asid - alkohol. Seterusnya, noda bahagian dengan eosin untuk tempoh yang singkat, biasanya beberapa saat hingga satu minit.
Langkah 10: Dehidrasi dan pemasangan
Selepas pewarnaan, bahagian tisu perlu dehidrasi lagi untuk mengeluarkan air dan kemudian dipasang dengan penutup. Pindahkan slaid berwarna melalui satu siri peningkatan kepekatan etanol (30%, 50%, 70%, 90%, dan 100%) untuk menghidrat tisu. Kemudian, pindahkan slaid ke xilena untuk membersihkan etanol.
Letakkan setitik medium pelekap di bahagian yang berwarna, dan berhati -hati meletakkan penutup di atasnya, mengelakkan pembentukan gelembung udara. Medium pelekap akan mengeras dari masa ke masa, mengamankan coverlip di tempat dan melindungi bahagian yang berwarna.
Kawalan kualiti dan penyelesaian masalah
Kawalan kualiti adalah aspek penting penyediaan slaid. Semak slaid yang disediakan di bawah mikroskop untuk memastikan bahawa bahagian -bahagiannya berkualiti. Cari tanda -tanda artifak, seperti lipatan, air mata, atau pewarnaan yang tidak sekata.
Sekiranya terdapat lipatan di bahagian, ia mungkin disebabkan oleh seksyen atau pengendalian yang tidak betul semasa pemasangan. Anda boleh cuba meratakan lipatan dengan perlahan -lahan memanaskan slaid pada hotplate. Pewarnaan yang tidak sekata mungkin disebabkan oleh penguraian yang tidak lengkap, masa pewarnaan yang tidak wajar, atau masalah dengan penyelesaian pewarnaan. Dalam kes sedemikian, anda mungkin perlu mengulangi proses pewarnaan atau menyesuaikan keadaan pewarnaan.
Kesimpulan
Menyediakan slaid tisu haiwan adalah proses langkah yang kompleks dan berbilang yang memerlukan perhatian yang teliti terhadap perincian. Setiap langkah adalah penting untuk mendapatkan slaid berkualiti tinggi yang dapat memberikan maklumat yang tepat mengenai struktur tisu. Sebagai pembekalSlaid mikroskop biologidanSlaid mikroskop yang disediakan, Kami memahami keperluan penyelidik, pendidik, dan profesional perubatan. Slaid mikroskop berkualiti tinggi kami dapat memastikan hasil terbaik dalam kajian dan diagnostik anda.
Sekiranya anda berminat untuk membeli slaid mikroskop kami atau mempunyai sebarang soalan mengenai penyediaan slaid, sila hubungi kami untuk perbincangan lanjut dan rundingan perolehan. Kami komited untuk menyediakan produk dan perkhidmatan terbaik untuk memenuhi keperluan saintifik anda.
Rujukan
- Bancroft, JD, & Gamble, M. (2008). Teori dan amalan teknik histologi. Churchill Livingstone.
- Kiernan, JA (2008). Kaedah histologi dan histokimia: teori dan amalan. Springer.
- Stevens, A., & Lowe, J. (2015). Histologi manusia. Elsevier.
